Milieu pour la culture in vitro de végétaux

Microbiologie, médecine biologique N. m. * milieu : du latin mi, qui est au centre et de lieu, mais aussi environnement d'un être vivant, conditions dans lesquelles il vit. Cette recette (d'après Catherine Variet-Coeffler, lycée Charles de Gaulle, CAEN) est plus spécialement destinée aux groupes d'étudiants qui veulent faire des TP sur le clonage ou le bouturage de végétaux et la croissance des boutures sur milieu nutritif. Le matériel : * Eau distillée * Gélose (chez Prolabo : réf. 20 768 235 ) * KOH 1N (id. : réf. 32 058 608) * Saccharose (id. : réf. 27 478 296) * Auxine : NAA (naphtalene acetic acid) (Sigma : réf. N0640) * BAP (6-benzylaminopurine) (Sigma : réf. B9395) * Milieu minéral "Murashige Skoog" sels et vitamines (id. : réf. M6899) * Petits pote de bébé et capsules (caps) * 1 bécher de 1 L * 2 flacons à vis de 100 mL * 1 pipette de 0,1 mL * 1 vaporisateur à main * Balance de précision (assez précise pour mesurer exactement 100 mg) * pH-mètre mesurant à 0,1 unité près * Autoclave ou autocuiseur "cocotte-minute" pour stérilisation humide * Réfrigérateur, congélateur * Étuve pour stérilisation à sec de la verrerie ou four à micro-ondes * Miniserre, pots, terreau * Éventuellement boîte à manipulations à UV ou hotte à flux laminaire * Chambre de culture ou aquarium adapté à cette fin. Préparation des milieux de culture 1° Les hormones ■ La solution de BAP à 1 g/L - Dans un bécher, dissoudre 100 mg de BAP dans 10 mL de KOH sous agitation magnétique - Compléter avec de l'eau distillée jusqu'à 100 mL ■ La solution d'auxine à 1 g/L - Même préparation - Les 2 solutions se conservent au froid et à l'obscurité pendant 1 an. 2° Préparer les milieux à implanter ■ Préparer 1 L de Murashige et Skoog solution fille - Y ajouter 30 g de saccharose + O,1 mL de solution mère de BAP + 1 mL de solution mère d'auxine - Ajuster le pH entre 5,5 et 6 - Ajouter 7,5 g de gélose, chauffer 5 min environ à 80°C jusqu'à dilution complète - Verser dans les pots de bébé (20 mL par pot) ; fermer avec les capsules. ■ Stériliser : autoclave ou autocuiseur (20 min après la mise en rotation de la soupape). - Puis laisser refroidir - Vérifier la fermeture des capsules - Conserver au réfrigérateur. 3° Préparer le milieu de repiquage (au moment de l'utilisation). Même préparation que celle des milieux à implanter, mais : - pas d'hormones - diluer de moitié le Murashige et Skoog.